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线粒体呼吸链复合体Ⅰ检测试剂盒使用说明!
发布时间:2019-12-17   点击次数:50次

线粒体呼吸链复合体Ⅰ检测试剂盒使用说明!

 

产品说明:

复合体Ⅰ(EC 1.6.5. 3)又称 NADH-CoQ 还原酶或 NADH 脱氢酶,广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞的线粒体中,是线粒体内膜中zui大的蛋白复合物。该酶催化一对电子从 NADH 传递给 CoQ,同时可使 O2还原生成 O2-,是呼吸电子传递链上产生 O2-的主要部位。测定该酶活性,

不仅可以反映呼吸电子传递链(ETC)状态,而且可以反映活性氧(ROS)生成状态。复合体Ⅰ能够催化 NADH 脱氢生成 NAD+,在 340nm 下测定 NADH 的氧化速率计算出该酶活性的大小。

 

试验中所需的仪器和试剂:

紫外分光光度计、台式离心机、水浴锅、可调式移液器、1mL 石英比色皿、研钵/匀浆器、丙酮、冰和蒸馏水。

 

操作步骤:

一、复合体的提取:

(1) 称取约 0.1g 组织或收集 500 万细胞,加入 1.0 mL 提取液,用匀浆器或研钵于冰上匀浆。

(2) 4 ℃ 600 g 离心 10min。

(3) 将上清液移至另一离心管中,4 ℃ 11000 g 离心 15min。

(4) 上清液即胞浆提取物,可用于测定从线粒体泄漏的复合体Ⅰ(此步可选做,可以判断线粒体提取效果)。

(5) 在沉淀中加入 400µL 提取液,超声波破碎(功率 20%,超声 5 秒,间隔 10 秒,重复 15 次),用于复合体Ⅰ酶活性测定,并且用于蛋白含量测定。

 

线粒体呼吸链主要由线粒体呼吸链酶组成,线粒体呼吸链酶复合物缺陷是导致线粒体病的重要原因(约有30%-40%的线粒体疾病是由于线粒体呼吸链酶缺陷造成),线粒体病种类较多,通常采用线粒体基因组分析与线粒体呼吸链酶活性检测的方式加以确诊。
 

呼吸链的四种复合体可受不同抑制剂的影响阻断其电子传递过程。其中异戊巴比妥作用于复合体Ⅰ;萎锈灵作用于复合体Ⅱ;抗mei素A作用于复合体Ⅲ;CN﹣作用于复合物Ⅳ中的氧化型Cyt a3,CO作用于还原型Cyt a3。以上抑制剂可阻断呼吸链的电子传递,引起机体迅速死亡。

 

线粒体呼吸链复合体Ⅰ检测试剂盒使用说明!

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