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细胞培养中经常遇到的误区有哪些
发布时间:2019-12-27   点击次数:50次

细胞培养中经常遇到的误区有哪些

 

错误1:一小管原代细胞在水浴中解冻一段时间

纠正1:原代细胞对解冻过程非常敏感,因此将小瓶置于37℃水浴锅中,保持并轻轻旋转直到内容物刚刚解冻是很重要的。然后应立即从水浴中取出小瓶,并转移到无菌操作台。确保您的培养瓶在解冻前已经准备就绪,以便可以立即用于接种细胞,并置于培养箱中。

 

错误2:解冻match小瓶后直接离心原代细胞

纠正2:我们不建议在解冻后离心细胞,因为离心程序比少量的DMSO残留更有害。记住,在恢复原代细胞后的第二天更换培养基以去除任何残留的DMSO。

 

错误3:允许原代细胞变得过于融合

纠正3:当生长至100%汇合时,原代细胞可以变得衰老。记住,原代细胞不是很纯,因此重要的是尽量减少污染细胞的生长。我们建议在细胞达到90-95%融合时,对原代细胞进行传代培养。

 

错误4:传代原代细胞时过度胰蛋白酶消化

纠正4:当细胞传代时,使用低浓度的胰蛋白酶并在显微镜下密切监测细胞。此外,记得在胰蛋白酶消化后完全中和细胞中的胰酶,因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。

 

错误5:原代细胞可以很容易地重新冻存

纠正5:通常我们不推荐重新冻存原代细胞,因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感,重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。

 

错误6:原代细胞可以无限的增殖

纠正6:与细胞系不同,原代细胞具有有限的扩增能力。我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移。此外,如果你正在使用一个增值困难的细胞类型,你应该密切监测细胞形态,因为少量混杂的细胞(如成纤维细胞)可能随着时间的推移,大量生长从而成为主要细胞。

 

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