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糖原检测试剂盒(测肝脏、肌肉组织)样本的处理方法!
发布时间:2019-06-14   点击次数:130次

糖原检测试剂盒(测肝脏、肌肉组织)样本的处理方法!

 

一、测定原理:
 
糖原在浓硫酸的作用下可脱水生成糖醛衍生物,后者再与蒽酮作用形成蓝色化合物,与同法处理的标准葡萄糖溶液比色定量。糖原在浓碱溶液中非常稳定,故在显色之前先将组织放入浓碱中加热以破坏其它成分而保留糖原。

 

样本前处理:
1.取样:取新鲜肝脏或肌肉样本生理盐水漂洗后,滤纸吸干,称重(样本重量≤100mg 为宜)。

2.水解:按样本重量(mg):碱液体积(μl)=1:3,一起加入试管,沸水浴煮 20min,流水冷却。

例如:肝脏组织称重 75mg 按重量体积比 1:3 应加入试剂 A 的量为 225μl;肌肉组织称重 85mg 按重量体积比 1:3 应加入试剂 A 的量为 255μl

*注:煮前用冰箱保鲜膜将管口扎起,以防水分蒸发。然后在膜上用针头扎一小孔,以便气体热胀冷缩。

3.将糖原水解液进一步制备糖原检测液:
肝糖原检测液为 1%,加蒸馏水的量为:肝脏重量×100-肝脏重量×4*=肝脏重量×96
肌糖原检测液为 5%,加蒸馏水的量为:肌肉重量×20-肌肉重量×4*=肌肉重量×16

注:4*为水解时碱液与组织的体积数。
例如上例:制备 1%肝糖原检测液,加蒸馏水的量为:75×96=7200μl=7.2ml;
制备 5%肌糖原检测液,加蒸馏水的量为:85×16=1360μl=1.36ml。

 

脂肪肝样本糖原测定
一、样本前处理:
取样:取新鲜肝脏样本用生理盐水漂洗后,滤纸吸干,称重(样本重量≤100mg 为宜,不要>100mg)。
2、水解:按样本重量(mg):碱液体积(μl)=1:3,一起加入试管,沸水浴煮20min,流水冷却。
   注:在煮前用冰箱保鲜膜将管口扎起,以防水分蒸发。然后在膜上用针头扎一小孔,以便气体热胀冷缩。
3、将糖原水解液进一步制备糖原检测液:
  肝糖原检测液为5%,加双蒸水的量为:肝脏重量×20-肝脏重量×4*=肝脏重量×16
  注:4*为水解时碱液与组织的体积数。
4、检测液除脂:取上述制备好的检测液(一般可见检测液上层漂浮有乳白色油状物),加入一定量的lv仿,可按照检测液量(ml):lv仿(ml)=4:1,漩涡混匀,3500转/分钟离心10分钟,取上清用于测定(如含量较高,需稀释后再测定)

 

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