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信帆生物与您分享明胶酶谱试剂盒实验小窍门!
发布时间:2019-12-17   点击次数:23次

信帆生物与您分享明胶酶谱试剂盒实验小窍门!

    
基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)以无活性的酶原形式分泌,活化后能够降解细胞外基质的胶原蛋白,又称胶原酶。通过影响细胞外基质,胶原酶参与胚胎发育、形态发生、组织重塑等过程,并参与炎症、肿瘤、心血管、神经等许多疾病过程。血浆与组织中的MMP-2、MMP-9参与各种生理与病理过程,其在临床诊断和治疗中的意义日益受到重视。


检测原理

本试剂盒采用酶谱法(Zymography)检测MMP-2、MMP-9 活性。Zymography 是一种广为使用的、基于SDS-PAGE 电泳和反相凝胶染色的蛋白酶检测方法,其灵敏度可达1 nM,高于ELISA方法,其基本原理和程序是:制备加有胶原酶底物的SDS-PAGE 凝胶,含蛋白酶的样品在此凝胶中进行电泳,电泳结束后取出凝胶与酶反应Buffer 孵育,凝胶染色与脱色。凝胶中由于含底物蛋白而被深染,形成深色背景,但在有蛋白酶条带的位置,蛋白酶将降解凝胶中的底物蛋白,因而不被染色而形成透亮区域,从而能同时指示MMP-2、MMP-9 的大小位置(酶谱)及活性。本试剂盒提供MMP-2、MMP-9 特异蛋白底物及酶学反应缓冲液,可检测少至0.1~0.5μl 血液中的MMP-2、MMP-9 酶谱及活性,检测灵敏度~1nM。试剂盒可进行50次标准小胶检测,如果小胶加样孔为10~15个,则总计可检测500~750个样品。
 

实验中的小贴士告诉大家:

1.做酶谱要测定样品蛋白的浓度(同Western blot,建议用BCA法);

2.酶谱法是测定样品中MMP-2、9活性的,如果煮沸使蛋白变性就没有用了,故禁忌煮沸;

3.上样缓冲液中也不能加β-巯基乙醇,这点由western blot转作明胶酶谱的朋友切记、切记;

4.蛋白上样量必须保证一样,不会出现一致的透明条带,如果不能保证上样量一致,测出的相对活性也没有统计分析的意义;

5.上样时zui重要的一点,必须在4℃环境中操作,我用的是冰台,同时所用的蛋白样品(-80℃冰箱)不能是以前曾解冻使用过的,必须是新取出的,因为只要解冻就会有部分酶降解,影响你的结果。此外做过一次酶谱的蛋白样品也不要反复使用,下次应使用其它已分装、未解冻过的样品;

6.电泳后的步骤很简单,液体别配错,照着方法做就可以了。

 

如果你曾做过Western blot,在这里恭喜你了,只要注意几个小细节,明胶酶谱对你非常简单。

 

购买我司试剂盒可以提供免费代测服务,客户准备好样本,上海和南京地区的客户可以提供免费上门取样服务。其他地区的客户,样本用泡沫箱子包好,放干冰或者冰袋寄送给我们。代测时间为5到7个工作日提供原始数据,分析数据, 实验操作步骤以及实验所用仪器。

 

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